Corpo Discente - Egressos

Eduarda Nattaly Ferreira Nobre Santos

Título

ESTUDO COMPARATIVO DA RESPOSTA DO ANTÍGENO rK39 EXPRESSA EM SISTEMA EUCARIOTO E PROCARIOTO PARA UTILIZAÇÃO NO DIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA

Data da Defesa

26/06/2018

Download

Visualizar Arquivo

Banca

Examinador	Instituição	Aprovado	Tipo
Prof.ª Dr.ª Danielle Ferreira de Oliveira	Universidade Estadual do Ceará	Sim	Titular
Prof.ª Dr.ª Maria Izabel Florindo Guedes	Universidade Estadual do Ceará	Sim	Titular
Prof. Dr. Mauricio Fraga van Tilburg	Universidade Estadual do Ceará	Sim	Presidente

Palavras-Chaves

Diagnóstico. Leishmania. Proteína Recombinante. Sistema Vegetal. Proteína K39.

Resumo

A Leishmaniose representa um grave problema de saúde pública principalmente nos países em desenvolvimento. No Brasil, o cão doméstico é considerado o principal reservatório epidemiológico para o gênero Leishmania, sendo um elo na transmissão e manutenção da Leishmaniose Visceral Zoonótica Humana. As principais medidas de controle, atualmente, aplicadas são direcionadas para a detecção e eliminação de cães infectados. Dessa forma, o diagnóstico precoce em caninos é crucial para o controle da doença, possibilitando uma interversão rápida. Diferentes plataformas de expressão podem ser usadas para a obtenção de proteínas que podem ser utilizadas em kits de diagnóstico. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho da proteína rk39 expressa em plataformas diferentes, utilizando a Escherichia coli como plataforma procariótica e a Nicotiana Benthamiana como plataforma eucariótica ou vegetal, e comparar a sensibilidade e especificidade apresentada por ambas as proteínas no diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). Para isso, utilizou-se as protéinas rk39 frente a soros de animais diagnosticados pelo Centro de Controle de Zoonoses – CCZ, com base em dois testes sorologicos, o DPP® e o ELISA-EIE®, recomendados pelo ministério da saúde para diagnóstico de LVC no Brasil. A metodologia utilizada para avaliação das proteínas foi feita através do teste imunoenzimático indireto (ELISA). Dentre os principais resultados pode ser verificada uma sensibilidade de 99% e especificidade de 30%, da rk39 expressa em sistema eucarioto, frente a uma sensibilidade de 92% e especificidade de 40%, apresentada pela rk39 produzida na plataforma procariótica. O desempenho, utilizando a rK39/eucarioto para a confirmação da infecção em casos clínicos apresentou alta positividade, com alta sensibilidade para detectar cães confirmados. Dessa forma, os resultados apresentados nesse estudo associado ao baixo custo e a menor biointerferência da plataforma vegetal tornam a rK39/eucarioto uma promissora proteína para uso em diagnóstico da LVC, em programas de controle e estudos epidemiologicos.

Abstract

Leishmaniasis is a serious public health problem, especially in developing countries. In Brazil, the domestic dog is considered the main epidemiological reservoir for the genus Leishmania, being a link in the transmission and maintenance of Human Zoonotic Visceral Leishmaniasis. The main control measures currently applied are directed to the detection and elimination of infected dogs. Thus, early diagnosis in canines is crucial for the control of the disease, allowing rapid interversion. Different expression platforms can be used to obtain proteins that can be used in diagnostic kits. The objective of this study was to evaluate the performance of the rk39 protein expressed in different platforms using Escherichia coli as a prokaryotic platform and Nicotiana benthamiana as a eukaryotic or vegetal platform, and to compare the sensitivity and specificity presented by both proteins in the diagnosis of Visceral Canine Leishmaniasis (LVC). For this, the rk39 proteins were used against sera from animals diagnosed by the Center for Zoonoses Control (CCZ), based on two serological tests, DPP® and ELISA-EIE®, recommended by the Ministry of Health for the diagnosis of LVC in Brazil. The methodology used to evaluate the proteins was made through indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Among the main results, a sensitivity of 99% and specificity of 30% of rk39 expressed in eukaryotic system can be verified, compared to a sensitivity of 92% and specificity of 40%, presented by rk39 produced in the prokaryotic platform. The performance, using the rK39 / eukaryote to confirm the infection in clinical cases showed high positivity, with high sensitivity to detect confirmed dogs. Thus, the results presented in this study, associated to the low cost and lower biointerference of the plant platform, make rK39 / eukaryote a promising protein to use in LVC diagnosis, control programs and epidemiological studies.

Voltar Topo