Corpo Discente - Egressos

Ilana Carneiro Lisboa Magalhães

Título

PRODUÇÃO DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES DO VÍRUS ZIKA EXPRESSAS EM SISTEMA PROCARIOTO

Data da Defesa

19/07/2018

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Banca

Examinador	Instituição	Aprovado	Tipo
Prof. Dr. Eridan Orlando Pereira Tramontina Florean	Universidade Estadual do Ceará	Sim	Presidente
Prof. Dr. Mauricio Fraga van Tilburg	Universidade Estadual do Ceará	Sim	Titular

Palavras-Chaves

Zika vírus (ZIKV). Microcefalia. Escherichia coli. Clonagem. expressão.

Resumo

A virose causada pelo Zika vírus (ZIKV) é considerada uma doença emergente desde seu primeiro grande surto no Sul do Pacífico em 2007 e mais recentemente nas Américas. Esta doença já foi previamente descrita por possuir semelhanças com outras viroses como Dengue, Febre do Nilo Ocidental, Encefalite Japonesa, Febre Amarela e, mais recentemente, Chikungunya. O alto número de pessoas infectadas durantes surtos recentes chamou a atenção de agentes de saúde e pesquisadores, onde os últimos achados sobre a doença mostram que esta virose está associada com doenças severas em humanas como Microcefalia e Síndrome de Guillain-Barré. De acordo com dados do Ministério da Saúde do Brasil, em 2016 houveram quase 130.000 casos confirmados da doença no país no mesmo ano (BRASIL, 2016) e até o mês de maio de 2018 já foram confirmados mais 2.700 casos de crianças com microcefalia relacionadas à doença (BRASIL, 2018a). Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo expressão e purificação das sequências das proteínas do Capsídeo, NS1, NS3 e NS4b do vírus isolado da Bahia e verificar sua especificidade e sensibilidade por meio de testes como ELISA e Western blot utilizando soro de pacientes infectados com ZIKV e DENV. A expressão foi obtida utilizando cepas de Escherichia coli BL21 (DE3) e BL21 Rosetta e o resultado foi analisado por Western blot. As proteínas recombinantes produzidas foram especificamente reconhecidas por anticorpos produzidos em camundongos, anticorpo comercial (anti-His), por soros de pacientes e salivas de crianças e mães que tiveram a doença. Os resultados obtidos com as proteínas recombinantes apresentaram maior sensibilidade e especificidade quando comparados com o Kit comercial Novagnost®. Conclui-se que as proteínas expressas e purificadas apresentam um grande potencial para futura produção de kits de diagnóstico para a doença.

Abstract

The disease caused by the Zika virus (ZIKV) has been considered an emerging disease since its first major outbreak in the South Pacific in 2007 and more recently in the Americas. This disease has previously been described as having similarities with other viruses such as Dengue, West Nile Fever, Japanese Encephalitis, Yellow Fever and, more recently, Chikungunya. The high number of people infected during recent outbreaks has caught the attention of health agents and researchers where recent findings on the disease show that this virus is associated with severe illnesses in humans such as Microcephaly and Guillain-Barre Syndrome. According to data from the Brazilian Ministry of Health, in 2016 there were almost 130,000 confirmed cases of the disease in the country in the same year (BRAZIL, 2016) and by May 2018, 2,700 cases of children with microcephaly related to disease (BRASIL, 2018a). Thus, the present work had as objective the expression and purification of the sequences of Capsid, NS1, NS3 and NS4b proteins from the virus isolated from Bahia and to verify their specificity and sensitivity by means of ELISA and Western blot tests using serum from patients infected with ZIKV and DENV. Expression was obtained using strains of Escherichia coli BL21 (DE3) and BL21 Rosetta and the result was analyzed by Western blot. The recombinant proteins produced were specifically recognized by antibodies produced in mice, commercial antibody (antiHis), by patient sera and saliva from children and mothers who had the disease. The results obtained with the recombinant proteins presented greater sensitivity and specificity when compared with the commercial Kit Novagnost. It is concluded that expressed and purified proteins present a great potential for future production of diagnostic kits for the disease.

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