| Título | Vitrificação de oócitos de felis catus em sistema simplificado e de baixo custo: Um modelo alternativo de base para aplicação na conservação de felídeos |
| Data da Defesa | 27/01/2021 |
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Banca
| Examinador | Instituição | Aprovado | Tipo |
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| Prof.ª Dr.ª Camila Calado de Vasconcelos | Centro Universitário CESMAC | Sim | Suplente | | Prof.ª Dr.ª Daniele Cristina de Oliveira Lima da Silva | Centro Universitário CESMAC | Sim | Titular | | Prof.ª Dr.ª Gabriela Liberalino Lima | Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Ceará | Sim | Titular | | Prof.ª Dr.ª Valesca Barreto Luz | Centro Universitário CESMAC | Sim | Presidente | | Prof. Dr. Sílvio Romero de Oliveira Abreu | Centro Universitário CESMAC | Sim | Titular |
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| Palavras-Chaves | Criopreservação. Álcool de polivinil. Felidae. Banco de germoplasma. |
| Resumo | Foram desenvolvidas várias técnicas para conservação de recursos biológicos como estratégia para a manutenção da biodiversidade e variabilidade genética, especialmente para felídeos selvagens ameaçados de extinção. Uma das técnicas mais promissoras e que permite uma vasta possibilidade de conservação de recursos genéticos é a vitrificação de oócitos, a qual consiste em submeter os oócitos juntamente com crioprotetores a criotemperaturas até que os mesmos adquiram as propriedades de um sólido. Com o objetivo de diminuir a citotoxicidade de crioprotetores e aprimorar a técnica de vitrificação de oócitos felinos, foi desenvolvido um meio simples para felinos domésticos contendo álcool polivinílico, com subsequente vitrificação de oócitos em hemi-palhetas francesas de 0,25 cc. Após a ovariosalpingohisterectomia (OSH) em clínicas veterinárias de Maceió-AL, os ovários foram colocados em tubos de Falcon contendo soro fisiológico e encaminhados a um laboratório de Alagoas para o procedimento de slicing e recuperação dos complexos cumulus-oócito (COCs) sob estereomicroscópio. Foram recuperados 817 oócitos e foram selecionados para a vitrificação 540 oócitos provenientes de 22 pares ovários de gatas domésticas, sendo vitrificado um total de 249 oócitos (n=249), enquanto que o controle foi composto de 112 oócitos. A vitrificação foi feita transferindo os oócitos para a gota E1 formada por solução de equilíbrio composta por 7,5% de dimetilsulfóxido (DMSO), 7,5% de etileoglicol, 0,1% de álcool polivinílico em meio base de solução de tampão de fosfato salino (PBS). Os oócitos ficaram 30 segundos na primeira gota e depois 4 minutos na segunda gota (E2) também formada por solução de equilíbrio, numa relação oócitos/meio de 10 oócitos/100 μL. Em sequência, os oócitos foram transferidos para a terceira gota (V1) contendo solução de vitrificação, composta de 15% de DMSO, 15% de etilenoglicol, 0,1% de álcool polivinílico e 0,3M de sacarose. Os oócitos permaneceram na terceira gota por 2 minutos. 150 oócitos foram desvitrificados e destes, 48 oócitos (32%) foram considerados viáveis e 102 oócitos (68%) foram classificados como não viáveis ao passo que 53 (47,32%) oócitos do grupo controle foram considerados não-viáveis e 59 (52,67%) oócitos foram classificados como viáveis. O meio de vitrificação desenvolvido no presente estudo obteve êxito similar a meios menos enriquecidos encontrados na literatura. Entretanto, mais estudos são necessários para a avaliação de outras taxas importantes, como a
taxa de maturação oocitária, taxa de fecundação, taxa de clivagem e taxa de formação de blastocisto. |
| Abstract | Several techniques have been developed for the conservation of biological resources as a strategy for the maintenance of biodiversity and genetic variability, especially for endangered wild felids. One of the most promising techniques that allows a vast possibility of conservation of genetic resources is the vitrification of oocytes, which consists of subjecting the oocytes together with cryoprotectors to cryotemperatures until they acquire the properties of a solid. In order to reduce the cytotoxicity of cryoprotectors and improve the technique of vitrification of feline oocytes, a simple medium was developed for domestic cats containing polyvinyl alcohol, with subsequent vitrification of oocytes in french hemi-reeds of 0.25 cc. After OSH in veterinary clinics of Maceió-AL, the ovaries were placed in Falcon tubes containing saline solution and sent to a laboratory in Alagoas for the procedure of slicing and recovery of COCs under stereomicroscope. 817 oocytes were recovered and 540 oocytes from 22 pairs of ovaries of domestic cats were selected to vitrification, and a total of 249 oocytes (n=249) were vitrified, while the control was composed of 112 oocytes. Vitrification was performed by transferring the oocytes to the E1 drop formed by an equilibrium solution composed of 7.5% dimethylsulfoxide (DMSO), 7.5% ethylene glycol, 0.1% polyvinyl alcohol in a base medium of saline phosphate buffer (PBS) solution. The oocytes remained for 30 seconds in the first drop and then 4 minutes in the second drop (E2) also formed by equilibrium solution, in an oocytes/medium ratio of 10 oocytes/100 μL. In sequence, the oocytes were transferred to the third drop (V1) containing vitrification solution, composed of 15% DMSO, 15% ethylene glycol, 0.1% polyvinyl alcohol and 0.3M sucrose. The oocytes remained at the third drop for 2 minutes. After vitrification, the oocytes were thawed and analyzed together with the control group in relation to their viability after staining with Trypan’s blue in a ratio of 5 μL per 100 μL of PBS. 150 oocytes were thawed and of these, 48 oocytes (32%) were considered viable and 102 oocytes (68%) were classified as non-viable while 53 (47.32%) oocytes of the control group were considered non-viable and 59 (52.67%) oocytes were classified as viable. The vitrification medium developed in the present study was similar to less enriched media found in the literature. However, further studies are needed to evaluate other important rates, such as oocyte maturation rate, fertilization rate, cleavage rate and blastocyst formation rate. |
