| Resumo | Substâncias de origem animal, como gema de ovo (GO) e leite desnatado, são
amplamente empregados na preservação do sêmen, mas representam um risco
potencial na contaminação do mesmo. O presente estudo teve como objetivo avaliar
o efeito do óleo de Moringa oleifera (MO) como crioprotetor de ação extracelular em
protocolos de criopreservação de sêmen caprino em diluente à base de água de coco
em pó (ACP-101c). Todos os ejaculados utilizados no estudo foram provenientes de
reprodutores que apresentaram qualidade seminal dentro dos parâmetros
estabelecidos pelo CBRA em 2013 para sêmen fresco. O diluente ACP-101c foi
preparado e fracionado em quatro alíquotas: T1 (controle: ACP-101c + 5% GO), T2
(ACP-101c + 0,5% MO), T3 (ACP-101c + 1,0% MO), e T4 (ACP-101c + 2,5% MO).
Após cada coleta e pré-avaliação, os ejaculados foram reunidos em um pool,
homogeneizados, divididos em quatro alíquotas e diluídos nos tratamentos T1, T2, T3
e T4 acima. Em seguida, cada tratamento foi fracionado em duas alíquotas, e uma foi
mantida em banho Maria a 37 °C por duas horas para realização do teste de
termorresistência (TTR) e a outra submetida a curva de refrigeração (-0,35 °C/min.)
até atingir 4 °C. Já para o protocolo de congelação elaborou-se um meio-base
contendo ACP-101c + 7% glicerol + 0,8 mg/mL de antimicrobiano (MB), em seguida o
mesmo foi fracionado em cinco alíquotas e a estas foram adicionados os
crioprotetores externos segundo os tratamentos: T1 (controle – MB + 5,0% GO), T2
(MB + 0,5% MO), T3 (MB + 1,0% MO), T4 (MB + 2,5% MO), e T5 (MB + 5,0% MO).
Após cada coleta e pré-avaliação, os ejaculados foram reunidos em um pool,
homogeneizados, divididos em cinco alíquotas e diluídos nos tratamentos T1 a T5
acima. Em seguida, as amostras foram refrigeradas até 4 °C (-0,35 °C/min),
envasadas em palhetas de 0,25 ml, congeladas em vapor de nitrogênio (- 60 °C) e
armazenadas em botijões criogênicos -196 °C. O sêmen fresco diluído foi avaliado
quanto à cinética espermática e submetido ao teste de termorresistência (TTR). O
sêmen refrigerado foi avaliado somente quanto à cinética espermática. Já o sêmen
pós-descongelação, foi avaliado quanto à cinética, à integridade de acrossoma, à
integridade de membrana espermática, à atividade mitocondrial, e à morfologia
espermática. Dos resultados obtidos no presente estudo pode-se concluir que o óleo
da M. oleifera adicionado ao meio de conservação de sêmen caprino à base de água
de coco em pó (ACP-101c) não apresenta toxicidade aos espermatozoides e preserva
a qualidade espermática, em protocolos de refrigeração a 4 °C, dentro dos valores
preconizados para a espécie caprino. No entanto, o óleo de moringa não foi eficaz em
proteger a membrana espermática durante o processo de congelação-descongelação,
tornando-se necessários novos estudos para aprimorar o meio de criopreservação. |
| Abstract | Substances of animal origin, such as egg yolk (EY) and skimmed milk, are widely used
in the preservation of sperm, but represent a potential risk of contamination. The
present study aimed to evaluate the effect of Moringa oleifera (MO) oil as a
cryoprotectant of extracellular action in goat sperm cryopreservation protocols in
powdered coconut water diluent (ACP-101c). All ejaculates used in the study came
from breeders that showed seminal quality within the parameters established by CBRA
in 2013 for fresh sperm. The ACP-101c diluent was prepared and divided into four
aliquots: T1 (control: ACP-101c + 5% EY), T2 (ACP-101c + 0.5% MO), T3 (ACP-101c
+ 1.0% MO ), and T4 (ACP-101c + 2.5% MO). After each collection and pre-evaluation,
the ejaculates were pooled, homogenized, divided into four aliquots and diluted in the
T1 to T4 treatments above. Then, each treatment was divided into two aliquots, and
one was kept in a water bath at 37 ° C for two hours to perform the thermo-resistance
test (TRT) and the other submitted to a refrigeration curve (-0.35 ° C / min.) until it
reaches 4 ° C. As for the freezing protocol, a base medium was prepared containing
ACP-101c + 7% glycerol + 0.8 mg / mL of antimicrobial (BM), then it was divided into
five aliquots and cryoprotectants were added to these, according to treatments: T1
(control - BM + 5.0% EY), T2 (BM + 0.5% MO), T3 (BM + 1.0% MO), T4 (BM + 2.5%
MO), and T5 (BM + 5.0% MO). After each collection and pre-evaluation, the ejaculates
were pooled, homogenized, divided into five aliquots and diluted in treatments T1 to
T5 above. Then, the samples were refrigerated to 4 ° C (-0.35 ° C / min.), filled in 0.25
mL straws, frozen in nitrogen vapor (- 60 ° C) and stored in cryogenic cylinders -196
°C. Fresh diluted sperm was evaluated for kinetics parameters and subjected to TRT.
Cooled sperm was evaluated only for kinetics parameters. The post-thaw sperm was
evaluated for kinetics, acrosome integrity, sperm membrane integrity, mitochondrial
activity, and sperm morphology. From the results obtained in the present study, it can
be concluded that M. oleifera oil added to the goat preservation medium based on
powdered coconut water (ACP-101c) is not toxic to spermatozoa and preserves sperm
quality, in cooling protocols at 4 °C, within the values recommended for the goat
species. However, moringa oil was not effective in protecting the sperm membrane
during the freeze-thaw process, making further studies necessary to improve the
cryopreservation medium. |
