| Título | Avaliação do uso de exossomos de leite caprino e bovino no encapsulamento e transporte de uma proteína ligante à quitina de moringa oleifera (MO-CBP3) |
| Data da Defesa | 12/06/2020 |
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Banca
| Examinador | Instituição | Aprovado | Tipo |
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| Prof.ª Dr.ª Danielle Ferreira de Oliveira | Universidade Estadual do Ceará | Sim | Suplente | | Prof.ª Dr.ª Helen Paula Silva da Costa | Universidade Federal do Ceará | Sim | Titular | | Prof.ª Dr.ª Maria Izabel Florindo Guedes | Universidade Estadual do Ceará | Sim | Titular | | Prof. Dr. Mauricio Fraga van Tilburg | Universidade Estadual do Ceará | Sim | Presidente |
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| Palavras-Chaves | Vesícula extracelular. Nanotecnologia. Entrega de moléculas. |
| Resumo | Vesículas extracelulares (VE) são estruturas membranosas envolvidas no processo de comunicação intercelular. Os exossomos são as menores VE, medindo em torno de 30-150 nm de diâmetro e sua principal função é o transporte de proteínas, ácidos nucléicos e lipídeos entre as células. Pesquisas utilizando exossomos como veículo
alternativo para o transporte e entrega de compostos bioativos são cada vez mais
frequentes, em virtude das vantagens que apresentam, como tamanho reduzido,
ampla distribuição no organismo e capacidade de burlar o sistema imune. O leite de
mamíferos é uma das principais fontes para a extração de exossomos, devido a
fatores como baixo custo, ausência de toxicidade, boa biodisponibilidade e fácil
método de obtenção. Nesse sentido, o objetivo desse estudo foi isolar os
exossomos provenientes de leite de cabra (LC) e do leite de vaca (LV) para
comparar a biodisponibilidade, tamanho e capacidade de encapsulamento de
compostos bioativos, bem como o transporte e a entrega de uma molécula para as
células. Para isso, os exossomos foram purificados por meio de ultracentrifugação
diferencial, caracterizados morfologicamente por microscopia eletrônica, avaliados
em relação a capacidade de encapsulamento utilizando a albumina de Moringa
oleifera, Mo-CBP3 (Moringa oleifera - Chitin binding protein) conjugada com FITC,
e, por fim, empregados em ensaios celulares. Foram testadas quatro metodologias
de encapsulamento: eletroporação, sonicação, incubação à temperatura ambiente
e choque térmico. Nossos resultados mostraram que os exossomos do LV são
quase 30% maiores que os LC. O conteúdo proteico próprio das amostras de LV e
LC foi de 36,6 e 30 mg/mL de proteína, respectivamente. A capacidade de
encapsulamento de proteína pelos exossomos foi confirmada por meio de SDSPAGE,
Western Blotting e espectofotometria de fluorescência. Os experimentos de
incubação em cultivo celular confirmaram também entrega destas nanopartículas
às células. |
| Abstract | Extracellular vesicles (EV) are membranous structures involved in the intercellular communication process. Exosomes are the smallest VE, measuring around 30-150 nm in diameter and their main function is the transport of proteins, nucleic acids and lipids between cells. Research using exosomes as an alternative vehicle for the transport and delivery of bioactive compounds is more and more frequent, due to the advantages they present, such as small size, wide distribution in the organism and ability to circumvent the immune system. Mammalian milk is one of the main sources for the extraction of exosomes, due to factors such as low cost, absence of toxicity, good bioavailability and easy method of obtaining it. In this sense, the objective of this study was to isolate exosomes from goat`s milk (LC) and cow`s milk (LV) to compare the bioavailability, size and encapsulation capacity of bioactive compounds, as well as the transport and delivery of one molecule to the cells. For this, the exosomes were purified by means of differential ultracentrifugation, morphologically characterized by electron microscopy, evaluated for encapsulation capacity using Moringa oleifera albumin, Mo-CBP3 (Moringa oleifera - Chitin binding protein) conjugated with FITC, and, finally, used in cellular tests. Four encapsulation methodologies were tested: electroporation, sonication, incubation at room temperature and thermal shock. Our results showed that LV exosomes are almost 30% larger than LC. The protein content of the LV and LC samples was 36.6 and 30 mg/mL of protein, respectively. The protein encapsulation capacity by the exosomes was confirmed by means of SDS-PAGE, Western Blotting and fluorescence spectrophotometry. The cell culture incubation experiments also confirmed delivery of these nanoparticles to the cells. |
